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PROVETOP

蛋白表达与制备服务

普维拓生物依托成熟的重组蛋白研发与生产经验，为高校、科研院所、生物医药企业及诊断试剂开发客户提供蛋白表达与制备服务。

针对蛋白分子量、结构域、跨膜区、信号肽、二硫键、翻译后修饰及下游应用需求，提供从序列分析、系统选择、载体构建、小试表达、纯化优化到质量检测的一站式服务。

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蛋白表达、制备与分析流程示意图

服务优势

面向最终应用 的样品

样品可用性

  1. 多表达平台，灵活匹配需求

    覆盖大肠杆菌、哺乳动物细胞和昆虫细胞等表达系统，根据结构、修饰、产量与用途推荐合适平台。

  2. 基于应用场景设计方案

    从标签位置、蛋白片段到缓冲液和质量指标，均围绕科研、抗体开发、筛选或诊断应用进行设计。

  3. 高难度蛋白项目经验

    针对低表达、易降解、易聚集、多二硫键、糖基化或复杂结构域目标制定多路径优化策略。

  4. 表达、纯化与检测一体化

    从基因到蛋白样品由同一技术链路持续推进，关键节点及时反馈，减少重复沟通与样品转移风险。

  5. 质量标准按需定制

    可按最终用途设置纯度、内毒素、聚集状态、活性及其他质量检测要求。

  6. 支持小试到放大制备

    支持微克级、毫克级科研样品制备，并可根据项目结果继续开展工艺优化与规模放大。

服务流程

项目流程与里程碑根据表达系统、构建复杂度、纯化难度和检测要求确定，并在技术评估后写入项目方案。

阶段一

方案评估

  1. 01

    序列分析与方案设计

    分析结构域、信号肽、跨膜区、修饰位点及不稳定区域，确定表达区间、标签与纯化方案。

    阶段交付方案与构建设计

阶段二

构建与表达

  1. 02

    基因合成与载体构建

    完成密码子优化、基因合成、表达载体构建与序列确认。

    阶段交付载体与序列确认
  2. 03

    小试表达与条件筛选

    评估表达量、可溶性、分泌效率和稳定性；困难目标进一步优化宿主、标签与培养条件。

    阶段交付小试结果与条件建议

阶段三

纯化与优化

  1. 04

    放大表达与蛋白纯化

    根据小试结果完成培养放大、蛋白收获和多步骤纯化，并优化缓冲液与保存条件。

    阶段交付纯化样品与过程记录
  2. 05

    质量检测与样品交付

    按约定完成纯度、浓度、分子量、内毒素、聚集状态或活性检测，整理报告并交付样品。

    阶段交付检测结果与样品交付

阶段四

验证与交付

  1. 06

    项目资料与使用建议

    交付项目实验报告、约定检测结果，以及样品储存、分装和使用建议。

    阶段交付随样品一并交付

服务范围与交付

从表达平台、可制备蛋白类型到质量检测与交付内容，均根据目标蛋白特性和最终用途进行配置。

多平台蛋白表达

技术范围

支持大肠杆菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞及其他定制表达方案评估。

执行重点

根据分子量、结构域、跨膜区、信号肽、二硫键和修饰需求匹配表达平台。

最终交付

表达方案与纯化蛋白样品

多类型与高难度蛋白

技术范围

覆盖细胞因子、受体胞外域、抗原、酶、融合蛋白、多结构域、糖基化及跨膜蛋白。

执行重点

针对低表达、易降解、易聚集或复杂折叠目标制定多构型、多体系优化策略。

最终交付

满足约定用途的目标蛋白

质量检测与项目交付

技术范围

可配置 SDS-PAGE、浓度、分子量、Western Blot、SEC、内毒素、微生物及活性检测。

执行重点

检测组合依据蛋白特性和下游用途确定，并同步考虑储存、分装和使用条件。

最终交付

蛋白样品、检测结果与项目报告

案例分享

以下为典型项目路径示例，展示不同类型蛋白如何选择表达体系、解决技术难点并形成交付结果。

  1. 哺乳动物细胞表达复杂糖蛋白

    项目需求

    制备人源受体胞外结构域，用于抗体筛选和蛋白互作；目标含多个糖基化位点和二硫键。

    技术方案

    完成结构域边界分析和分泌构建设计，采用哺乳动物细胞瞬时表达，并通过亲和纯化与分子筛去除聚集体。

    项目结果

    获得高纯度、状态均一的目标蛋白，可用于后续抗体结合和分子互作实验。

  2. 原核表达低可溶性抗原蛋白

    项目需求

    原有方案表达量低且以包涵体为主，需要获得适用于动物免疫的抗原蛋白。

    技术方案

    调整表达区间和标签位置，筛选菌株、诱导温度与时间，并比较可溶性表达和包涵体复性路线。

    项目结果

    目标蛋白可溶性表达得到改善，纯化样品满足后续免疫实验需求。

  3. 细胞因子表达与活性验证

    项目需求

    制备具有细胞活性的重组细胞因子，用于细胞培养和体外功能研究，并控制内毒素水平。

    技术方案

    采用适合分泌表达的真核体系，多步骤纯化控制杂质与聚集体，并开展内毒素和细胞水平活性检测。

    项目结果

    获得纯度、内毒素及生物学活性满足约定要求的样品，可用于后续细胞实验。

常见问题

立项评估和项目执行前，建议优先确认这些关键问题。

只有蛋白名称，没有完整构型，可以启动吗？

可以先做可行性沟通。请同时说明物种、目标用途和已知结构信息，我们会据此讨论构型边界。

如何选择表达体系？

根据蛋白大小、修饰需求、结构复杂度、用途和预算综合判断，并在高风险项目中保留备选方案。

可以由你们协助优化蛋白序列或标签吗？

可以围绕结构域边界、信号肽、标签位置和纯化需求讨论构型方案；涉及功能位点或知识产权的设计需由双方共同确认。

项目开始前需要提供哪些信息？

通常需要目标序列或数据库编号、物种、预期构型、下游用途、期望样品形式及已知风险信息。

交付的质量检测项目是否固定？

不固定。基础项目和补充分析会根据蛋白性质、样品量及最终用途在立项时确认。

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